国际麻醉学与复苏杂志   2010, Issue (3): 195-198
    
硝普钠对大鼠局脑缺血/再灌注后神经型一氧化氮合酶的影响
戚思华 李贞贞 李晓光 李军 李文志1()
1.150001， 哈尔滨医科大学第四临床医学院麻醉科 （戚思华、 李贞贞、 李晓光、 李军） ； 哈尔滨医科大学第二临床医学院麻醉科 （李文志）
Effect of sodium nitroprusside on hippocampal nNOS expression in a rat model of focal cerebral ischemia-reperfusion
 全文:
摘要：

目的 观察硝普钠 （sodium nitroprusside，SNP） 对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后海马区神经型一氧化氮合酶 （neuronal nitricoxide synthase，nNOS） 表达的影响及在脑保护作用中的机制。 方法 108 只健康雄性SD 大鼠，体重 250 g~300 g， 采用线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉 （middle cerebral artery，MCA） 梗塞局灶性脑缺血模型， 随机分为 3 组， 每组 36 只。正常对照组 （C组） ： 左侧脑室内注射生理盐水 5 ul 后， 暴露颈内动脉但不栓塞 MCA； 局灶性脑缺血组 （I 组） ： 左侧脑室内注射生理盐水 5 ul后， 栓塞MCA 2h； 硝普钠组 （S组） ： 左侧脑室内注射硝普钠 0.055 mg/kg （溶于5 ul生理盐水中） 后， 栓塞MCA 2h。 各实验组按不同再灌注时间随机分为 3 个亚组 （n=12） ： 分别为再灌注 2h 组、 6h 组和 12h 组。各实验组于动物清醒后进行神经学功能评分；苏木素- 伊红 （HE） 染色， 观察脑组织病理学改变； 免疫组织化学 （IH） 法测定海马区 nNOS 蛋白表达； 半定量逆转录- 聚合酶链反应（RT- PCR）法测定海马区 nNOS mRNA 表达。 结果 I 组和 S 组各亚组神经细胞死亡率均高于 C 组（P<0.05） ；与 I 组 2h（43.8±2.1） 、 6h （73.9±4.7） 亚组比较， S 组 2h （36.5±1.2） 、 6h （42.6±1.9） 亚组神经细胞死亡率降低（P<0.05） 。I 组和 S 组各亚组nNOS mRNA 的表达均高于 C 组 （P<0.05） ； 与 I组 2h （0.4721±0.0115） 、 6h （0.7442±0.0116） 亚组比较， S 组 2h （0.4283±0.0004） 、 6h （0.4827±0.0052） 亚组 nNOS mRNA 的表达降低（P<0.05） 。I 组和 S 组各亚组 nNOS 蛋白表达，除 S 组 6h 亚组外， 均高于 C 组 （P<0.05） ； 与 I 组 2h （0.2658±0.0005） 、 6h （0.2840±0.0134） 亚组比较， S 组2h （0.2514±0.0011） 、 6h （0.2590±0.0040） 亚组 nNOS 蛋白的表达降低（P<0.05） 。 结论 硝普钠对大鼠局灶性脑缺血 / 再灌注损伤有保护作用，其机制可能与抑制nNOS 的表达有关。
关键词： 局脑缺血/再灌注；神经型一氧化氮合酶；硝普钠；侧脑室
Abstract:

Objective To investigate the effect of sodium nitroprusside （SNP）on hippocampal neuronal nitricoxide synthase（nNOS） expression after focal cerebral ischemia- reperfusion in rats and the mechanism of neuroprotective effect of SNP. Method 108 male SD rats weighting 250g- 300g were randomly divided into 3 groups（n=36） . Focal ischemia- reperfusion was established by occlusion of middle cerebral artery（MCA） .Control group（C） : in which sham operation was performed；Ischemia- reperfusion group（I） : after sodium chloride （5 ul）was injected into the lateral cerebral ventricle using microsyringe，MCA was occluded for 2h；SNP group（S） : SNP（0.055 mg/kg， 5 ul）was injected into the lateral cerebral ventricle using microsyringe，then MCA was occluded for2 h. The experimental groups were further divided into 3 subgroups （n=12）according to the reperfusion time: 2h，6h and 12 h. Neurological function score were tested before reperfusion；Pathological changes were observed by HE staining；The hippocampal tissue were obtained for detection of nNOS protein expression by immuno- histochemistry technique and nNOS mRNA expression by RT- PCR technique. Results Neuronal mortality in every subgroup of group I and S increased significantly compared with that in groupC （P<0.05） ；Compared with that in 2h （43.8±2.1)， 6h（73.9±4.7）subgroup of groupI，neuronal mortality in 2h（36.5±1.2） ，6h（42.6±1.9）subgroup of group S decreased significantly （P<0.05） ；There were more nNOS mRNA expression in every subgroup of groupI and S compared with that in groupC（P<0.05），nNOS mRNA expression in 2h（0.4283±0.0004），6h（0.4827±0.0052） subgroup of group S decreased compared with that in 2h（0.4721±0.0115） ，6h （0.7442±0.0116） subgroup of groupI （P<0.05） ；The expression of nNOS protein in other subgroup of groupI and S increased except that in 6h subgroup of group S （P<0.05） ； Compared with that in 2h （0.2658±0.0005），6h （0.2840±0.0134）subgroup of groupI，the expression of nNOS protein in 2h（0.2514±0.0011），6h（0.2589±0.0040）subgroup of group S decreased（P<0.05） . Conclusion SNP could attenuate the focal cerebral ischemia/reperfusion injury and the possible mechanism may be related to the inhibition of nNOS expvession. the inhibition of nNOS expvession.
Key words: Focal cerebral ischemia/reperfusion；Neuronal nitricoxide synthase；Sodium nitroprusside；Lateral cerebral ventricle