目的 探讨缺氧复氧(hypoxia reoxygenation, HR)对H9C2心肌细胞凋亡、自噬和焦亡3种细胞死亡方式的影响。 方法 将培养的H9C2心肌细胞按随机数字表法分为正常对照组(Ctrl组)和HR组,其中HR组H9C2心肌细胞在缺氧培养箱中进行氧糖剥夺8 h,然后复氧12 h。通过检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)含量及四甲基偶氮唑盐[3‑(4,5‑dimethylthiazol‑2‑yl)‑2,5 diphenyl tetrazolium bromide, MTT]比色法检测细胞活力来评估细胞损伤情况(每组6孔),Western blot检测(每组9孔)细胞凋亡相关蛋白[天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate‑specific proteinase, caspase)‑3、B细胞淋巴瘤/白血病‑2(B‑cell lymphoma/leukemia 2, Bcl‑2)、Bcl相关蛋白(bcl‑associate x protein, Bax)]、自噬相关蛋白[(轻链蛋白3(light chain 3, LC3)Ⅱ/Ⅰ、p62、Beclin‑1、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin, p‑mTOR)]、焦亡相关蛋白[Nod样受体蛋白‑3(nod‑like receptor pyrin domain3, NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis associated speck‑like protein, ASC)、caspase‑1p20、IL‑1β、IL‑18]。通过免疫荧光染色进一步评估细胞凋亡、自噬及焦亡情况(每组6孔)。 结果 与Ctrl组比较,HR组H9C2心肌细胞HR后细胞活力降低(P<0.05),LDH释放增加(P<0.05),活化的caspase‑3及Bax的表达上调(P<0.05),Bcl‑2表达下降(P<0.05),TUNEL染色显示HR后细胞凋亡显著增加(P<0.05),提示HR后细胞凋亡及损伤增加;而p‑mTOR、p62均表达增加(P<0.05),但LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin‑1蛋白降低(P<0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ免疫荧光染色显示HR后细胞内的自噬小体增加(P<0.05),表明HR后H9C2心肌细胞自噬受到明显抑制;同时炎性小体NLRP3、ASC、caspase‑1p20蛋白均显著上调(P<0.05),活化的炎症细胞因子IL‑1β、IL‑18表达增加(P<0.05),提示HR后NLRP3炎性小体活化,细胞焦亡增加。 结论 H9C2心肌细胞在HR损伤过程中自噬被抑制,细胞焦亡及凋亡增加。