目的 探讨基于多肽阵列技术合成的穿膜肽离体条件下抑制非受体酪氨酸激酶Fyn与突触后致密蛋白PSD95相互作用,进而抑制含NR2B亚基的N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-asparate,NMDA)受体的磷酸化的可行性。方法 ①通过多肽阵列技术的overlapping平台确定Fyn的SH2结构域与突触后致密蛋白PSD95的PDZ3结构域相互作用的结合基序,合成含此结合基序的短肽Fynp并与Tat蛋白转导结构域连接形成可进入细胞的穿膜肽Fynp-Tat,同时合成乱序穿膜肽mFynp-Tat。②原代培养SD大鼠胎鼠脊髓背角神经元,通过免疫荧光检测不同浓度(10 μM, 20 μM, 30 μM)组的穿膜肽内化细胞的效率。③用CCK8法检测不同浓度(10 μM, 20 μM, 100 μM)穿膜肽分别孵育神经细胞(6 h, 24 h, 48 h)的细胞毒性。④将神经细胞分为穿膜肽Fynp-Tat组,乱序穿膜肽mFynp-Tat组和PBS对照组进行孵育,用GST pull-down和Western Blotting验证抑制Fyn与 PSD95相互作用的效率。结果 ①通过overlapping确定的Fyn与 PSD95相互作用的结合基序为(KGAYSL)。②Fynp-Tat组浓度为20 μM时内化效率为(91.5±2.0 %),与10 μM组比较(77.3±1.4 %,P<0.05)有差异;③当Fynp-Tat组浓度为100 μM,作用时间为24 h,才出现细胞活力(75.1±1.5 %)降低,与(100 μM, 6 h)组比较(82.5±3.0 %,P<0.05)有差异;④Fynp-Tat组与mFynp-Tat组、PBS对照组相比,Fynp-Tat组能够抑制PSD95结合到GST-Fyn融合蛋白上 (P<0.05),但不会抑制PSD95 结合到GST-NR2B融合蛋白上 (P>0.05)。结论 离体条件下,基于多肽阵列技术合成的穿膜肽(KGAYSLYGRKKRRQRRR)Fynp-Tat能够进入神经细胞,细胞毒性低,可有效抑制Fyn与PSD95的相互作用。