【摘要】 目的 筛选有效抑制血管内皮细胞小窝蛋白-1(caveolin-1)表达的小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)序列,并检测转染复合物的细胞毒性。 方法 设计合成针对caveolin-1的siRNA 3条(siRNA422,siRNA548,siRNA710)及一条带绿色荧光标记的通用阴性对照FAM-siRNA。在siRNAFect(siRNA transfection reagent)介导下转染血管内皮细胞。用Real-Time PCR测定转染后血管内皮细胞中caveolin-1 mRNA的表达,Western blot方法测定干扰后caveolin-1蛋白表达,比较抑制率,筛选出有效抑制caveolin-1表达的siRNA。采用磺基罗丹明B法(sulforhodamineB,SRB)分析转染复合物的细胞毒性。 结果 ①在siRNAFect相同剂量下,siRNA20、30或40 nmol•L-1组转染效率均达到85%以上(P<0.01);②siRNAFect1.3 μL复合10或20 nmol•L-1siRNA组细胞存活率均达到80%以上(P<0.05);③siRNA548对EA.hy926细胞caveolin-1基因mRNA抑制效果最明显(P<0.01);④与阴性对照组及siRNA422、siRNA710相比,siRNA548干扰血管内皮细胞48h后,caveolin-1蛋白的表达量最低(P<0.01)。结论 ① siRNA548对血管内皮细胞caveolin-1表达的抑制效果最大。② siRNA浓度 20 nmol•L-1复合siRNAFect 1.3 μL转染效率高,细胞毒性低,适合转染。